◇◇新语丝(www.xys.org)(newxys2.com)(xys10.dxiong.com)◇◇   没有证据表明核酸检测高假阴性最大问题是试剂盒质量问题   作者:杨别青   2月10日, 南京医科大学公共卫生学院流行病学系教授杨蓉西在“知识分子” 发文回答为何现在核酸检测的假阴性如此之高的问题时说“从一些报道来看,病 人要经常要做上三四次核酸检测,甚至是四五次的实验,才知道是阳性还是阴性。 而就算这样,可能还有好多人检测出来是阴性,但已经出现白肺了。或者有些人 核酸检测阳转阴了,但其实是假阴性。这就说明,好些试剂盒在早期研发的时候, 并未完成试剂的优化,质控,灵敏度特异性测试等等,所以导致灵敏度不够,检 测的结果不稳定。”最后得出的结论是“最大的问题并非产量,而是质量”。   其实,这样的结论的推出是不够严谨的。   诚然,由于疫情爆发过于突然,试剂盒的研发流程,少量的预临床试验,以 及标准化生产都难以保证质量,但这只是可能性的问题,目前没有确凿的证据支 持“假阴性高最大的问题是试剂盒的质量问题”这个结论。   假阴性高的问题确实存在,“病人测了6次核酸试剂都为阴性,直到第7次才 测出阳性”。中国医学科学院院长王辰院士在接受央视采访时表示,“对于真是 这个病的病人,也不过只有30%-50%的阳性率“。   如果我们分析假阴性高的可能原因,不外乎以下四个方面可能原因:1)检测 仪器质量问题;2)检测人员的操作水平;3)试剂盒的质量问题;4)待检样品的质量.   下面我们具体分析这几个原因的可能性。   1. 检测仪器质量问题   如果检测仪器质量有问题,具体会表现出诸如不稳定,阳性结果和阴性结果 不如预期等等,操作人员很容易发现这些问题并且披露出来,另外,Real time-PCR仪器的使用已经数十年,仪器的可靠性已经为大家所公认,既然很容易 发现而且迄今无人抱怨或指出,我们应该认为没有证据表明检测仪器质量有问题。   2. 检测人员的操作水平   在检测新冠病毒核酸的过程主要包括核酸提取,反转录和realtime-PCR三个 过程,操作难度不大,有分子生物学基础操作经验的普通技术员新人经过半天或 几天的培训就可以做实验,何况医院的专门检验员? 如果是检测人员的操作水 平问题,很容易表现为,各个医院假阴性的差异,班次的差异等等。既然没有人 发现和披露,我们也只能认为没有证据表明检测仪器质量有问题。   3. 试剂盒的质量问题   本次国内各公司试剂盒的研发,批准和生产都是匆匆上马,这是疫情似火的 条件下不得已而为之。但病毒核酸检测试剂盒的研发门槛很低,基本每个分子生 物学博士研究生都能设计PCR引物。难度很小的和产品不需要长时间的研发, 最快的公司24小时就出产品了,为什么?本质上就是设计PCR引物和合成引物 的时间。   评价试剂盒的质量有一套成熟的指标,譬如,阳性对照和阴性对照的稳定性, 检测病毒拷贝数的下限有没有达标等等。   在没有这些证据的情况下根据“病人要经常要做上三四次核酸检测,甚至是 四五次的实验,才知道是阳性还是阴性”的结果并不能直接推导出试剂盒导致灵 敏度不够,检测的结果不稳定”的结果。   4.待检样品的质量    采样的一个基本原则是:采样取自病变区域或病变涉及区域最有可能检测到 病毒。从医学的角度,呼吸道是肺呼吸时气流所经过的通道。呼吸道分为上、下 两部分:鼻、咽、喉合称上呼吸道;气管、主支气管及肺内的各级支气管,合称 为下呼吸道,新冠病毒的易感细胞是下呼吸道和肺泡。   首先,待检样品的质量好坏影响检测结果是不可忽视的原因。最常用的检测 手段咽拭子采集方法决定了高假阴性。每个医护人员采集的手法和经验也直接影 响到采集到的病毒数量。   我们最常用的检测手段是咽拭子采集疑似病患样品,采样的部位是上呼吸道 咽, 不是病毒容易侵犯的下呼吸道地方,自然假阴性就会高。已经知道在这些采 样咽拭子,唾液,痰液,肺泡灌洗液中以肺泡灌洗液最高, 就是这个道理(文献 1)。   样品的采集区域影响结果的另一个证据是41个经过核酸检测确证的住院肺 炎病人采血检测的阳性率只有15%(文献1),由于病人采血的操作差异最小, 这个差异基本是采集血本身造成的, 因为血不是病毒最容易侵犯的地方。   其次, 病人采样的时间段也影响采集的病毒数量,比如早期,中期和晚期, 早期例如潜伏期时没有症状,病毒数量可能较少,中期采集到的病毒数量就相应 多。SARS病人3周后的血液病毒数量反而减少了。   再次,由于RNA很不稳定,容易降解,采集后样品的处理和提取是否合理直 接影响RNA的质量。   综上所述,从已有的证据来看,导致假阴性高的最可能的原因是采集到的病 毒数量不足或样品的处理和提取不当, 没有证据表明检测试剂盒质量有问题。   2-12-2020   文献1: https://www.thelancet.com/journals/lancet/article/PIIS0140-6736(20)30183-5/fulltext#%20 (XYS20200309) ◇◇新语丝(www.xys.org)(newxys2.com)(xys10.dxiong.com)◇◇